宫颈癌细胞放射损伤后IER5蛋白表达及其相互作用蛋白的筛选和验证

作者：于新平; 马腾; 周平坤; 吴玉梅

来源：中华放射医学与防护杂志, 2017, 37(04): 246-250.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2017.04.002

• 宫颈癌
• IER5
• 免疫共沉淀
• 质谱分析

目的了解IER5蛋白经放射损伤后的表达变化,并筛选IER5蛋白在放射损伤后可能参与DNA损伤修复通路中的相互作用蛋白。方法 HeLa细胞经4 Gy γ射线照射后在不同时间点收集细胞,提取总蛋白质和细胞核蛋白行Western blot检验;构建3×Flag标签融合表达的IER5蛋白表达载体,转染人肾上皮细胞293T并照射,收集细胞行免疫沉淀富集IER5的结合蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离免疫共沉淀复合物,考马斯亮蓝染色观察差异条带并切胶酶解后行质谱分析,对可能相互作用蛋白结果进行Western blot验证。结果 IER5蛋白照后4 h表达逐渐增加,12 h至高峰,持续至48 h;细胞核内IER5蛋白表达也有增加趋势;质谱分析数据表明,照射组检测出374个蛋白,对照组检测出256个蛋白,两组比较差异蛋白41个,照射组中包括与DNA结合、代谢、损伤修复相关的10个蛋白;其中,与DNA损伤修复密切相关的1型聚ADP核糖基化聚合酶(PARP1)得到Western blot验证。结论 IER5是放射损伤相关蛋白,其可能参与DNA损伤修复通路。

• 单位
  军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 首都医科大学附属北京妇产医院