重组黄杆菌肝素酶Ⅲ的纯化、表征及培养条件对酶生产的影响(英文)

作者：高兴; 赵健; 范立强; 李素霞; 王富军; 姬胜利; 袁勤生

来源：生物工程学报, 2009, (11): 1718-1724.

DOI：10.13345/j.cjb.2009.11.004

• 肝素酶Ⅲ
• 谷胱甘肽-S-转移酶
• 肝素黄杆菌
• 可溶性表达
• 表征 Heparinase III
• glutathione-S-transferase(GST)
• Flavobacterium heparinum
• soluble expression
• characterization

肝素酶III是一种特异性地裂解乙酰肝素的酶,在大肠杆菌中表达时容易形成包涵体。为实现肝素酶III的可溶性表达,利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与肝素酶III融合性能,通过构建相应的表达质粒pGEX-heparinaseIII,在大肠杆菌中实现了肝素酶Ⅲ的可溶性表达。粗酶通过一步亲和纯化其纯度可达95%以上。通过对LB培养基摇瓶培养Escherichia coli BL21的诱导时机、诱导剂用量、诱导时间等培养条件的优化,确定了该可溶性肝素酶III融合蛋白的最适生产条件。通过对纯酶的最适反应温度、pH、Ca2+浓度等一系列性质研究,确定了该酶的最适反应条件。

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学; 山东大学