淀粉样前体蛋白的原核表达、纯化及抗血清的制备和应用

作者：石琦; 韩俊; 高晨; 李锋; 张宝云; 周玉玲; 董小平

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2006, (03): 258-261.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2006.03.019

• 淀粉样前体蛋白
• 原核表达
• 蛋白酶抗性
• 多克隆抗体

提取SH-SY5Y细胞的总RNA并合成单链cDNA,用PCR方法扩增出APP基因羧基端片段.测序后克隆至表达载体,在大肠杆菌M15中分别表达APP-C100和GST-APP-C100融合蛋白,纯化的GST-APP-C100分子量约为38kD,APP-C100约为18kD,此外在APP-C100纯化产物中还存在有超过97kD的聚合物.体外蛋白酶消化实验显示纯化的GST-APP-C100和APP-C100单体对蛋白酶K消化敏感,而APP-C100聚合物具有抵抗蛋白酶消化能力.以GST-APP-C100免疫实验用兔后得到的APP抗血清经Western印迹鉴定可特异性识别重组及细胞内源性APP.

• 单位
  传染病预防控制国家重点实验室; 西安交通大学; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所