组蛋白去乙酰化酶6调控鞭毛重组蛋白A干扰巨噬细胞自噬

作者：郑荣慧; 李攀; 曹秀琴; 陈民佳; 陈海霞; 杨志伟^*

来源：宁夏医科大学学报, 2023, 45(06): 573-592.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2023.06.006

• 嗜肺军团菌
• 鞭毛蛋白
• 组蛋白去乙酰化酶6
• 自噬

目的观察组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)调控嗜肺军团菌鞭毛重组蛋白A(rfla A)对小鼠巨噬细胞自噬相关因子表达的影响，分析其可能的作用机制。方法采用支气管肺泡灌洗法提取C57BL/6J与HDAC6-/-C57BL/6J两种小鼠巨噬细胞，用小鼠巨噬细胞表面标记物F4/80鉴定；纯化rfla A,CCK-8法检测其对小鼠巨噬细胞半数抑制浓度(IC50)，筛选最佳作用浓度用于后续实验；rfla A分别干预C57BL/6J及HDAC6-/-C57BL/6J小鼠巨噬细胞6、12和24 h,RT-q PCR、Western blot及免疫荧光检测各组自噬相关因子自噬效应蛋白1(Beclin1)、自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)、SQSTM1蛋白(P62)的表达水平。结果根据CCK-8结果计算，IC50为0.41μg·μL-1，最佳作用浓度为0.041μg·μL-1用于后续实验；RT-q PCR、Western blot、免疫荧光结果显示，rfla A干预C57BL/6J小鼠巨噬细胞后，与0 h相比，6、12、24 h HDAC6的表达水平升高，LC3、ATG5表达水平均降低，P62的表达水平升高，Beclin1的表达水平先降低后升高(P均<0.05);rfla A干预HDAC6-/-C57BL/6J小鼠巨噬细胞后，与0 h相比，6、12、24 h LC3、ATG5、Beclin1表达水平均升高，P62的表达水平降低(P均<0.05)；在相同的时间点，与C57BL/6J小鼠巨噬细胞各组相比，HDAC6敲除后各组细胞ATG5、LC3表达水平升高，Beclin1先升高后降低，P62降低(P均<0.05)。结论HDAC6促进rfla A抑制小鼠巨噬细胞自噬，HDAC6可能通过影响微管蛋白乙酰化干扰巨噬细胞自噬。

• 单位
  银川市第三人民医院; 宁夏医科大学; 基础医学院