Thermotoga petrophila普鲁兰酶基因的异源表达与酶学性质分析

作者：邢岩; 邱爽; 聂慧慧; 孙利鹏; 邱立友; 王明道

来源：河南农业大学学报, 2018, 52(03): 404-423.

DOI：10.16445/j.cnki.1000-2340.2018.03.016

• 超嗜热菌
• 普鲁兰酶
• Thermotoga petrophila
• 异源表达
• 酶学性质分析

通过生物信息学筛选出来源于超嗜热菌Thermotoga petrophila(DSM13995)的普鲁兰酶基因,以从德国菌种保藏中心购买的基因组作为出发材料,克隆出普鲁兰酶基因TP-pul A;通过二步PCR方法构建含有该嗜热普鲁兰酶基因的载体pET21a-TP-pul A;将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中测定其酶学性质。结果表明,TP-pul A为Ⅰ型普鲁兰酶,最适pH值为6.4,最适温度是85℃,半衰期为26.28 h,Na+、K+、Ca2+、Mg2+对其酶活性有明显的促进作用,Mn2+、Co2+、AL3+、Fe3+、SDS及EDTA对酶活性有不同程度的抑制作用,Km、Vmax、Kcat及Kcat/Km值分别为0.72 g·L-1、0.004 9 mmol·L-1·s-1、154.63 s-1、214.76 L·g-1·s-1。本研究采用的生物信息学方法比传统的筛菌方法简单方便耗时短,且获得的嗜热普鲁兰酶的热稳定性好、催化效率高、对普鲁兰糖有较强的底物亲和能力,具有良好的应用前景。

• 单位
  河南仰韶生化工程有限公司; 生命科学学院; 河南农业大学; 农业部