激活泛素—蛋白酶体系对脊髓小脑共济失调7型细胞模型中共济失调蛋白—7的作用研究

作者：刘冰; 付云; 苏莹珍; 贺启莲; 帅红艳; Xin Yu^*

来源：成都医学院学报, 2022, 17(02): 146-151.

• 脊髓小脑共济失调7型
• 1-[1-(4-氟苯基)-2
• 5-二甲基-1H-吡咯-3-基]-2-(1-吡咯烷基)乙酮
• 多聚谷氨酰胺
• 泛素-蛋白酶体系
• 共济失调蛋白-7

目的 探索在脊髓小脑共济失调7型(SCA7)细胞模型中，1-[1-(4-氟苯基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-基]-2-(1-吡咯烷基)乙酮(IU-1)激活泛素-蛋白酶体系(UPS)后对多聚谷氨酰胺(PolyQ)共济失调蛋白-7(ATXN7)的作用。方法 在稳定表达ATXN7突变蛋白及非突变蛋白的ATXN7-Q65和ATXN7-Q10神经细胞模型中，利用5×104μmol/L IU-1和0.2μmol/L环氧甲酮四肽分别增强和抑制UPS的降解作用，进而观察ATXN7突变蛋白对细胞的毒性作用。利用蛋白质印迹技术和斑点过滤杂交法检测ATXN7突变蛋白的表达，2-(4-磺苯)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐(WST-1)法分析细胞存活率。结果 在构建的两组神经细胞模型中，ATXN7-Q65细胞表达的ATXN7蛋白及其聚合体随着诱导时间的延长而明显增加，且与ATXN7-Q10细胞相比，在诱导12 d后ATXN7-Q65细胞的存活率明显下降，细胞凋亡率增加(P<0.05);当加入Dox抑制剂后，与ATXN7-Q10细胞相比，ATXN7-Q65细胞可溶性ATXN7蛋白在24 h内降解缓慢，ATXN7聚合体水平不变。在ATXN7-Q65细胞中，加入IU-1增强UPS活性，12 d后细胞毒性降低，存活率升高；而用环氧甲酮四肽抑制UPS活性，12 d后细胞毒性增高，存活率降低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UPS可有效清除突变蛋白ATXN7,IU-1激活UPS活性能增强突变蛋白ATXN7的清除并降低细胞毒性。

• 单位
  昆明学院; 转化医学研究院; 基础医学院; 大理大学