牛疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的表达、纯化及抗原性检测

作者：翟璐; 杨思宇; 肖雪; 黄艳梅; 张海威; 宋佰芬^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2020, (20): 76-160.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.11.0163

• 牛疱疹病毒Ⅰ型
• gD蛋白
• 原核表达
• 糖基化修饰
• 蛋白免疫印迹

为了能表达出具有良好免疫原性的牛疱疹病毒Ⅰ型(BoHV-1)gD蛋白,为进一步建立BoHV-1检测方法奠定基础,试验将BoHV-1 gD蛋白的基因片段通过PCR扩增、连接、转化的方法连接到pGEX-6P-1载体上,经过单双酶切鉴定、PCR鉴定后测序。测序结果与NCBI上公布的BoHV-1 gD蛋白的氨基酸序列进行对比,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及ELISA检测方法对蛋白质表达情况、抗原性进行检测分析。结果表明:gD基因成功插入pMD18-T载体中,将测序结果与已经发表在NCBI上的BoHV-1 gD蛋白基因比对,相似性为98%,共有19个碱基发生突变,并无碱基插入或缺失。通过软件翻译与原始氨基酸序列(AFB76672.1)进行比对,共有8个氨基酸发生突变。将gD基因插入pGEX-6p-1载体中,命名为pGEX-6p-gD质粒,构建的pGEX-6P-gD/BL21(DE3)重组菌表达出的蛋白质与目的蛋白质大小一致,且该蛋白质免疫后小鼠血清特异性识别BoHV-1。说明本试验成功表达出具有部分免疫原性的BoHV-1重组gD蛋白。

• 单位
  黑龙江八一农垦大学; 生命科学技术学院