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摘要
探讨通过凋亡抑制剂阻断PRRSV诱导的细胞凋亡来促进PRRSV体外复制，从而提高PRRSV体外培养滴度的可行性。本研究以PRRSV高致病毒株（HP-PRRSV）感染Marc-145细胞，并用三种凋亡抑制剂（Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHD-FMK）分别处理PRRSV感染细胞，通过比较在不同的浓度、不同的作用时间处理下PRRSV培养滴度（TCID_(50)）来筛选最佳抑制剂及其最佳使用浓度和作用时间。同时采用caspase-8活性蛋白酶检测试剂盒、实时荧光定量PCR（quantificational real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）、流式细胞术等检测在最佳抑制剂作用下caspase-8活性、细胞凋亡及其通路相关因子表达情况。结果显示：z-IETD-FMK（caspases-8特异性抑制剂）为最佳抑制剂，10 μmol/L为最佳使用浓度，PRRSV感染细胞48 h后加入10μmol/L Z-IETD-FMK能最大限度提高PRRSV体外培养滴度。此外，PRRSV感染Marc-145细胞后，细胞caspase-8活性显著增加，且随着感染时间的延长，细胞凋亡率及促凋亡因子Bax均呈上升趋势，而抑凋亡因子Bcl-2表达水平却呈下降趋势；用抑制剂z-IETD-FMK处理后，细胞caspases-8活性下调，细胞凋亡率也下降，Bax表达量显著低于不加抑制处理的病毒感染组（P < 0.01），与此相反Bcl-2的表达水平为升高趋势，显著高于不加抑制处理的病毒感染组（P < 0.01）。说明，caspase-8特异性抑制剂能有效抑制PRRSV诱导的细胞凋亡。结果提示HP-PRRSV感染可通过caspase-8途径诱导Marc-145细胞凋亡，从而抑制病毒的复制。使用caspase-8特异性抑制剂可有效抑制细胞凋亡，进而提高病毒体外培养滴度。
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