鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)的表达与纯化

作者：王慧璇; 蔡伟; 程建军; 王胜军; 许化溪^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(08): 887-896.

DOI：10.13350/j.cjpb.200805

• 鲍曼不动杆菌
• 外膜蛋白Omp33-36
• 蛋白纯化

目的利用pET-28a蛋白表达载体,在大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)。方法 PCR扩增获得鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa)基因,克隆入pET-28a表达载体,构建重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS中,经IPTG诱导蛋白表达,对包涵体表达的蛋白进行变性复性处理,用镍柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果PCR扩增获得大小约862bp的目的片段,构建的重组表达质粒pET28a/Omp33-36aa20-299,经双酶切鉴定成功插入目的基因片段,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导成功表达Omp33-36aa20-299 6His重组蛋白,SDS-PAGE电泳显示重组蛋白分子质量单位约为31.5ku,经镍亲和纯化得到高纯度的重组Omp33-36。结论成功重组表达鲍曼不动杆菌Omp33-36外膜蛋白片段(20-299aa),为进一步研究其对免疫系统的影响奠定了实验基础。

• 单位
  江苏大学