高活力5′-磷酸二酯酶制备及水解RNA的研究

作者：张一平; 华洵璐; 李靖; 谢骏; 何义进

来源：生物技术, 2010, (01): 62-65.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2010.01.009

• 麦芽根
• 5′-磷酸二酯酶
• 核苷酸
• 超滤
• 盐析 barley rootlets
• 5′-phosphodiesterase
• 5′-nucleotides
• ultrafiltration
• salting out

目的:获得高活力5′-磷酸二酯酶液,提高核酸RNA酶解效率。方法:采用超滤和盐析技术对从麦芽根浸提液中纯化5′-磷酸二酯酶工艺进行研究,采用单因子试验法优化酶解工艺条件。结果:浸提液依次经过5万Da超滤膜浓缩、40%饱和度硫酸铵盐析、5万Da超滤膜脱盐后,酶活力可达1 500U/ml;第1次超滤膜透过液可作为浸提液循环使用,酶活力是水浸提的1.15倍;第2次超滤膜透过液浓缩5倍后,可回收56.46%硫酸铵,浓缩母液可按1∶2比例循环使用;在底物浓度5.8%、酶用量8%、反应时间2h条件下,RNA酶解率可达95%。结论:初步建立了适合工业化规模的核苷酸生产新工艺。

• 单位
  中国水产科学研究院淡水渔业研究中心; 江苏省苏微微生物研究有限公司