柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白重组枯草芽孢杆菌的构建与鉴定

作者：刘嘉韵; 陈学秋; 阳毅敏; 吴飞; 潘灵韬; 赵明秀; 王钊; 杜爱芳^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(08): 1602-1606.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.08.12

• 柔嫩艾美耳球虫
• EtMIC2
• 枯草芽孢杆菌
• 芽孢表面展示

旨在通过芽孢表面展示技术构建柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌，为防控鸡球虫感染提供新思路。首先从柔嫩艾美耳球虫和枯草芽孢杆菌基因组中分别扩增EtMIC2基因和芽孢衣壳蛋白编码基因CotB,通过重叠PCR技术将两者融合后克隆至pDG364中，构建整合型重组质粒pDG364-CotB-EtMIC2,并通过电转化将融合基因CotB-EtMIC2整合于枯草芽孢杆菌amyE基因位点，最后利用PCR、Western blot和免疫荧光等技术进行鉴定。结果显示，成功克隆目的基因EtMIC2,与锚定元件CotB融合成功，且定点整合于枯草芽孢杆菌基因组，融合蛋白正确表达并可在芽孢表面检测到特异性荧光信号。本研究成功构建能够表面展示EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌，可用于后续评估其抗球虫免疫保护效果。

• 单位
  动物科学学院; 浙江大学