2, 3, 7, 8-四氯二苯并二英诱发小鼠腭裂的作用及其机制研究

作者：武洋; 张玉薇; 岳浩迪; 高素华; 何志东; 陈瑶; 余增丽; 刘小转^*

来源：中华口腔医学杂志, 2022, 57(04): 397-402.

• 腭裂
• 2, 3, 7, 8-四氯二苯并二英
• 母系印记基因3
• Smads蛋白分子

目的探索2, 3, 7, 8-四氯二苯并二英(2, 3, 7, 8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, TCDD)诱发小鼠腭裂的作用及机制。方法将84只孕鼠根据体质量按随机数字表随机分为TCDD组和对照组(每组42只), 在孕期第10天(gestation day 10, GD10)上午8时分别给予64 μg/kg TCDD和等量玉米油灌胃。HE染色观察GD13～GD15胎鼠腭发育的形态学变化, 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)免疫荧光观察TCDD对GD13～GD15胎鼠腭突间充质细胞增殖的影响, 原位杂交和实时定量PCR(real-time PCR, RT-PCR)检测母系印记基因3(maternally expressed gene3, MEG3)在胎鼠腭突间充质细胞中的定位和表达, 蛋白质印迹法检测胎鼠腭突间充质细胞内Smad2、磷酸化Smad2(phospho-Smad2, p-Smad2)、Smad4、Smad7的蛋白表达, RNA 结合蛋白免疫沉淀实验(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)验证MEG3与转化生长因子β受体Ⅰ(transforming growth factor-β receptor Ⅰ, TGF-βRⅠ)的相互作用。结果与对照组相比, TCDD组GD13(t=6.66, P=0.003)和GD14(t=6.56, P=0.003)胎鼠腭突间充质细胞中BrdU阳性细胞率显著减少, 但在GD15时BrdU阳性细胞率显著增加(t=-5.98, P=0.004)。原位杂交显示MEG3主要表达于间充质细胞的细胞核。RT-PCR结果显示, TCDD组腭突间充质细胞内的MEG3相对表达量显著高于对照组(GD13:t=39.28, P=0.012;GD14:t=18.75, P=0.042;GD15:t=28.36, P=0.045)。在GD14, TCDD组胎鼠腭突间充质细胞内p-Smad2、Smad4蛋白表达均显著低于对照组(p-Smad2:t=9.48, P=0.001;Smad4:t=63.10, P=0.001), Smad7蛋白表达量显著高于对照组(t=30.77, P<0.001)。RIP实验结果显示, TCDD组GD14胎鼠腭突间充质细胞中TGF-βRⅠ结合MEG3的表达量(23.940±1.301)显著高于对照组(8.537±1.523)(t=24.55, P<0.001)。结论 TCDD可能通过促进MEG3与TGF-βRⅠ的靶向结合影响TGF-β/Smad信号途径的激活, 从而抑制腭突间充质细胞的增殖, 由此导致腭裂的发生。

• 单位
  郑州大学; 河南省人民医院; 公共卫生学院