科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
大多数TIL家族的蛋白酶抑制剂都可以抑制组织蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或弹性蛋白酶的活性，其抑制活性和抑制特异性可能受到P1、P1′残基和Cys2nd–Cys6th二硫键桥的影响。本研究对AmCI、AsATI和AsC/E-1的编码序列进行了密码子优化和基因合成，并利用点突变技术对其关键位点Cys2nd和Cys6th进行替换，结合原核表达和胶内活性染色分析，探讨Cys2nd–Cys6th对典型TIL类蛋白酶抑制剂抑制活性和抑制特异性的影响。SDS-PAGE结果显示，AmCI、AsATI和AsC/E-1及其突变体在上清中皆有表达。胶内活性染色结果显示，AmCI不仅能抑制胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶活性，还能强烈抑制枯草杆菌蛋白酶活性，但对胰蛋白酶没有抑制作用。AsATI能抑制胰蛋白酶活性，却不能抑制胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶活性。AsC/E-1不仅可以抑制胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶活性，还能强烈抑制枯草杆菌蛋白酶活性，但不抑制胰蛋白酶活性。替换Cys2nd和Cys6th后，AmCI、AsATI和AsC/E-1原有的抑制活性皆大大降低。值得注意的是，AsATI的突变体产生了微弱的枯草杆菌蛋白酶抑制活性。三维结构预测结果表明，AmCI、AsATI和AsC/E-1及其突变体都具有2个反向平行的β折叠片，大多数区域为无规则卷曲结构。上述研究结果表明，Cys2nd–Cys6th对典型TIL类蛋白酶抑制剂的抑制活性和抑制特异性至关重要。该研究不仅为AmCI、AsATI和AsC/E-1的生理功能研究奠定基础，还能为TIL类蛋白酶抑制剂活性和特异性的定向改造提供依据。
- 单位
