灰霉菌Myosin I的体外表达纯化及抑制剂筛选

作者：宋国红; 刘松涛; 李林蔚; 刘飞; 张峰

来源：南京农业大学学报, 2023, 1-8.

• 灰霉菌
• Myosin I
• 表达
• 纯化
• 抑制剂筛选

[目的]本文旨在体外表达纯化灰霉菌的I型肌球蛋白（MyosinI）及筛选抑制剂。[方法]采用SF9昆虫细胞蛋白表达系统表达灰霉菌MyosinI（BcMyosinI）马达结构域，用亲和层析和凝胶过滤层析纯化方法纯化蛋白，用SDS-PAGE和Western Blot检测蛋白表达情况。从实验室已有的化合物库中，用ATPase活性试剂盒测定化合物对BcMyosin I的酶活性抑制率。采用菌丝生长速率法测定部分化合物对灰霉菌的菌丝生长抑制活性。以禾谷镰刀菌I型肌球蛋白（FgMyosin I）三维结构为模板，同源模建预测BcMyosin I三维结构。用AutoDock-Vina软件将部分化合物与BcMyosin I进行分子对接。[结果] 成功在体外表达纯化BcMyosin I 。20 μmol·L~(-1)条件下，化合物B1和B17对BcMyosin I的酶活性抑制率分别为56.24%和65.39%，显著高于对照药剂氰烯菌酯对酶活的抑制率（27.29%）；B1和B17对灰霉菌的菌丝生长抑制率分别为32.90% 和83.44%，显著高于对照药剂氰烯菌酯对菌丝生长的抑制率（1.06%）。对照药剂氰烯菌酯与BcMyosin I的结合自由能为-7.0 kcal·mol~(-1)，而化合物B1和B17与BcMyosin I的结合自由能分别为-8.5和-8.8 kcal·mol~(-1)，结合自由能越低，说明化合物对BcMyosin I的抑制活性均高于氰烯菌酯。[结论] 成功获得BcMyosin I单体蛋白；筛选出B1和B17两个灰霉菌肌球蛋白抑制剂。

• 单位
  南京农业大学; 江苏省中国科学院植物研究所