人源性Notch1跨膜段真核表达载体的构建及鉴定

作者：张凯举; 余和芬; 张玉祥

来源：首都医科大学学报, 2009, 30(04): 500-503.

DOI：10.3969/j.issn.1006-7795.2009.04.020

• Notch信号
• NTM
• 人胰腺癌
• 真核表达载体

目的构建人源性Notch1跨膜段(notch1 transmembrane domain,NTM)真核表达载体pcDNA3-NTM,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录-聚合酶链反应从人胰腺癌细胞系BxPC3细胞中获得编码Notch1跨膜段的cDNA,定向克隆至C端带flag蛋白标签序列的真核表达载体pcDNA3中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内Notch1跨膜区的表达。结果构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,将其转染HeLa细胞48h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内Notch1跨膜段的表达显著增高。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,为研究Notch信号的活化机制及其在胰腺癌发生发展中的作用奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 首都医科大学