苜蓿中华根瘤菌烯酯酰ACP还原酶FABI2的原核表达纯化以及多克隆抗体的制备

作者：张亚璇; 王海洪; 樊振川^*

来源：天津科技大学学报, 2018, 33(05): 20-24.

DOI：10.13364/j.issn.1672-6510.20170077

• 苜蓿中华根瘤菌
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体

烯酯酰ACP还原酶基因fab I是脂肪酸合成途径中的关键基因,苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)基因组中有这一基因的同源基因fab I1和fab I2,为了对中华苜蓿根瘤菌烯酯酰ACP还原酶基因fab I2的功能进行深入研究,本实验进行该基因多克隆抗体的制备.从已有的pET-28b-FABI2质粒中扩增出目的片段,构建了带有GST标签的原核表达载体p GEX-2T-FABI2,将两个标签的表达载体转入大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)后,在0.1,mmol/L IPTG、20,℃、185,r/min条件下诱导6,h,分别获得相对分子质量约为2.8×104、5.4×104表达fab I2的重组蛋白,且均在上清液中以可溶性蛋白的形式存在.将经Ni柱亲和纯化的6×His-FABI2融合蛋白免疫新西兰大白兔,4次免疫后测效价达256,000.进一步将抗血清经过ProteinA纯化获得了高特异性和灵敏度的多克隆抗体.以得到的抗体为一抗,另一个标签的抗原上样进行免疫印迹(Westernblot)检测,为单一条带,说明制备的多克隆抗体能够很好地识别FABI2蛋白,并且排除了标签所产生的抗体对Western blot结果的影响.

• 单位
  华南农业大学; 天津科技大学