西藏环状病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

作者：冯盼盼; 殷启凯; 赵洁荣; 付士红; 李樊; 何英; 许松涛; 梁国栋; 聂凯^*; 王环宇^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2021, 35(02).

• 西藏环状病毒
• 实时荧光定量RT-PCR
• 分子检测

目的建立一种灵敏、特异的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR), 用于快速、准确地检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)。方法收集GenBank数据库中全部TIBOV基因序列, 利用Clustal X 2.1软件进行比对, 根据分析结果选择TIBOV VP4基因保守区域设计特异性引物、探针;以体外转录的RNA为标准品, 建立检测TIBOV的TaqMan RT-PCR方法, 绘制荧光定量标准曲线;对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价。结果引物与探针具有良好的特异性, 对多种虫媒病毒无交叉反应。检测反应灵敏度为1.0×102拷贝/反应, 在1.0×102～8拷贝/反应模板范围内具有良好的扩增曲线, 同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%。对西藏自治区、云南省、湖南省和广东省采集的蚊虫样本进行筛查, 结果均为阴性。TIBOV模拟样本检出率为100%。结论该方法灵敏度高、特异性强, 可用于TIBOV的常规监测。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所