杜拉鲁肽类似药(27C7)的蛋白表达及理化性质分析

作者：赵丽丽; 谢艺嘉; 王玲玲; 朱中松; 张贵民; 刘忠^*

来源：药物评价研究, 2020, 43(02): 237-241.

• 胰高血糖素样肽-1
• 中国仓鼠卵巢细胞
• 理化性质
• 杜拉鲁肽

目的真核表达杜拉鲁肽类似药胰高糖素样肽l(GLP-1)-Fc融合蛋白(27C7),并与杜拉鲁肽进行理化性质比较。方法构建真核表达载体pCHO1.0-GLP-1-Fc,并用脂质体转染CHO细胞,经甲氨蝶呤和嘌呤霉素加压筛选,再单克隆筛选,得到1株高表达的细胞模型。采用Protein A亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE检测蛋白大小,质谱仪进行高分辨分子量检测,高效液相色谱法检测蛋白纯度,毛细管等点聚焦电泳(CIEF)检测蛋白等电点,细胞活性功能评价杜拉鲁肽与27C7生物活性的一致性。结果通过SDS-PAGE、样品高分辨分子量检测,27C7与杜拉鲁肽分子量一致;分子排阻色谱检测27C7与杜拉鲁肽单体纯度接近,CIEF显示27C7与杜拉鲁肽的等电点一致;体外活性检测结果表明,27C7与杜拉鲁肽的生物学活性一致。结论类似药27C7与杜拉鲁肽具有一定的一致性,可进行下一步的类似药研发工作。