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摘要
目的 探讨轴索导向分子信号素蛋白3A(SEMA3A)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响及其可能机制。方法 40只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(正常喂养)、模型组[腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病视网膜病变(DR)模型]、si-SEMA3A组(建立DR模型后，双眼玻璃体内注射病毒滴度为1×109 IU/mL的SEMA3A-si RNA慢病毒10μL)、si-SEMA3A+DAPT组[建立DR模型后，双眼玻璃体内注射病毒滴度为1×109 IU/mL的SEMA3A-siRNA慢病毒10μL和浓度为10μmol/L的Notch1通路抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)10μL]，每组10只。各组处理12周后取样，采用SEMA3A和RGC标志物POU结构域转录因子3a(Brn3a)双标记免疫荧光染色检测大鼠视网膜组织中SEMA3A蛋白的表达定位；H-E染色检测大鼠RGC密度，TUNEL染色检测大鼠RGC凋亡情况，ELISA法检测大鼠视网膜组织中炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平，蛋白质印迹法检测大鼠视网膜组织中SEMA3A、Notch1及caspase 3蛋白的表达水平。结果 双标记免疫荧光染色确定SEMA3A在大鼠RGC中特异性表达。与对照组比较，模型组大鼠的RGC密度较低(P<0.05);si-SEMA3A组大鼠的RGC密度大于模型组和si-SEMA3A+DAPT组(P均<0.05)。对照组大鼠视网膜组织中未检测到TUNEL阳性RGC，模型组大鼠视网膜组织中TUNEL阳性RGC较多，RGC凋亡率为(49.55±7.82)%；与模型组比较，si-SEMA3A组大鼠RGC凋亡率较低(P<0.05)，而si-SEMA3A+DAPT组大鼠RGC凋亡率高于si-SEMA3A组(P<0.05)。模型组大鼠视网膜组织中IL-6、TNF-α、SEMA3A和caspase 3的表达水平均高于对照组，Notch1表达水平低于对照组(P均<0.05)；与模型组比较，si-SEMA3A组大鼠视网膜组织中IL-6、TNF-α、SEMA3A和caspase 3表达水平均降低，Notch1表达水平升高(P均<0.05);si-SEMA3A+DAPT组大鼠视网膜组织中IL-6、TNF-α、SEMA3A和caspase 3表达水平均高于si-SEMA3A组，Notch1表达水平低于si-SEMA3A组(P均<0.05)。结论 SEMA3A可能通过Notch1信号通路参与糖尿病大鼠RGC凋亡，有望成为DR的治疗靶点。
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