摘要

为明确环核苷酸门控离子通道蛋白基因GhCNGC1对棉花抗逆的作用,本研究利用PCR技术从棉花叶片中克隆该基因,通过生物信息学分析其理化性质,利用荧光定量方法分析在不同激素诱导情况下的GhCNGC1表达模式和组织表达特异性,并构建VIGS沉默载体并转化棉花,利用荧光定量PCR方法检测沉默效率。结果表明,以棉花叶片cDNA为模板成功克隆GhCNGC1基因,该基因开放阅读框为2 262 bp,编码一个含753个氨基酸的酸性亲水性蛋白,相对分子质量188.71 kD。荧光定量PCR检测结果表明,该基因对茉莉酸(JA)、水杨酸(SA)和双氧水(H2O2)处理均有一定程度的相应,RT-qPCR分析结果表明,GhCNGC1基因在根、茎、叶、花、萼片和苞片中均有表达,在叶中表达量最高。构建该基因的VIGS沉默载体转化棉花,RT-qPCR结果表明,该基因在棉花中已经沉默,表达量相比对照植株降低70%左右,表明成功构建GhCNGC1沉默载体并在棉花体内正常运行。