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摘要
目的研究hTERT启动子调控下单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)重组质粒的构建、在人胃癌细胞BGC823中的表达及对胃癌细胞BGC823增殖的影响。方法构建重组质粒pGL3-hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc~+:经纳米磁流体PEG-PEI/Fe3O4转染胃癌细胞BGC823,荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率,免疫组织化学(免疫组化)方法检测目的基因在胃癌细胞BGC823中的表达,MTT法检测胃癌细胞BGC2823的增殖能力,以上实验均以正常肝细胞L02为对照。结果重组质粒pGL3-hTERT-tk构建成功,其长度为1100 bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-TK-Luc~+均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞BGC823,转染效率为(28.1±2.3)%。免疫组化结果显示。重组质粒组胃癌细胞BGC823的细胞质中可见大量HSV-tk基因编码的表达。MTT检测结果示,转染pGL3-hTERT-tk质粒4 d后.BGC823细胞增殖受抑制,其4_(570)值为0.254±0.011,低于L02细胞的0.322±0.013:亦低于pGL3-basic-tk转染的BGC823细胞(0.357±0.014)(均P<0.05)。结论纳米磁流体能将重组质粒pGL3-hTERT-tk转染BGC2823细胞并获得表达,PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体-tk可显著抑制BGC823细胞增殖,有望成为胃癌基因治疗的新型生物制剂之一。
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单位中南大学湘雅二医院; 新疆医科大学第一附属医院
