发动蛋白(dynamin)抑制剂Dyngo-4a在大鼠骨髓间充质干细胞内吞葡聚糖过程中存在脱靶效应

作者：张颖; 朱静; 许皓; 易勤; 颜亮; 叶亮; 张心愿; 谭彬^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2023, 39(01): 57-62.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.009491

• 脱靶效应
• 发动蛋白
• Dyngo-4a
• 内吞作用
• 葡聚糖
• 骨髓间充质干细胞(BMSC)

目的 研究发动蛋白(DNM)抑制剂Dyngo-4a在依赖DNM的内吞途径中可能存在的脱靶作用。方法 分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)并进行流式细胞术鉴定，将细胞分为抑制剂对照组、 Dyngo-4a处理组、转染阴性对照(si-NC)组、 DNM2小干扰RNA(si-DNM2)转染组、转染和Dyngo-4a共处理组。反转录PCR和Western blot法验证DNM2基因沉默效率，CCK-8法检测Dyngo-4a处理后细胞活性变化，共聚焦显微镜检测内吞的Dylight649标记的转铁蛋白(transferrin-Dylight649)和四甲基罗丹明标记的葡聚糖(dextran-TMR)阳性的囊泡数量以及平均荧光强度。结果 使用小干扰RNA能显著下调BMSC的DNM2的mRNA和蛋白表达，转染组内吞的转铁蛋白囊泡数量与转染阴性对照组比较明显降低，si-DNM2转染组内吞的葡聚糖囊泡数量和平均荧光强度与si-NC组比较变化不明显，转染si-DNM2和Dyngo-4a共处理组与单独si-DNM2转染组比较，Dyngo-4a处理组与抑制剂对照组比较，葡聚糖囊泡数量和平均荧光强度均明显降低。结论 Dyngo-4a作为靶向DNM的抑制剂在葡聚糖内吞进BMSC过程中存在脱靶效应。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院