产气荚膜梭菌青海分离株α毒素基因克隆与表达

作者：王光华; 周继章; 蔺国珍; 郑福英; 曹小安; 邱昌庆

来源：浙江农业学报, 2010, (02): 145-149.

• 产气荚膜梭菌
• α毒素基因
• 基因克隆
• 核苷酸序列 Clostridium perfringens
• alpha-toxin gene
• gene cloning
• nucleotide sequencing

用PCR技术,从一株田间分离的产气荚膜梭菌基因组中扩增出了1194bp的α毒素基因,经限制性核酸内切酶EcoRⅠ和NcoⅠ双酶切处理后将其连接在经同样内切酶处理的载体pET-28a(+)中的相应位点上,最后转化至受体菌BL21(DE3)中。经PCR、双酶切和核苷酸序列分析,证明重组质粒pET-28a-CPA含有产气荚膜梭菌α毒素基因,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,目的基因获得了良好表达。以羊抗α毒素多克隆血清进行Western blot分析,抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应,表明目的蛋白具有较好的免疫原性。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所