质谱技术鉴定组织型激肽释放酶脑相关蛋白的研究

作者：王伟; 高秀兰; 朱健; 徐兵; 苏敬敬

来源：现代中西医结合杂志, 2014, 23(28): 3079-3089.

DOI：10.3969/j.issn.1008-8849.2014.28.001

• 组织型激肽释放酶
• 质谱技术
• 生物素
• 免疫共沉淀
• Homer1b/c

目的采用质谱技术鉴定组织型激肽释放酶(TK)的脑相关蛋白。方法将含全长、无信号肽的TK基因质粒转染生物素标记Neuro-2a细胞,细胞裂解液用兔源性抗GFP抗体进行免疫共沉淀,特异性识别生物素的链亲和素-辣根过氧化物酶进行检测;将纯化的TK蛋白与大鼠脑组织抽提上清液作用后进行免疫共沉淀,裂解蛋白进行SDS-PAGE电泳银染;将上述电泳所得差异蛋白切胶酶解打质谱后分析数据;RT-PCR检测缺氧再复氧的Neuro-2a细胞内源性差异蛋白在TK处理后的表达变化。结果 GFP-TK-full转染组较GFPTK-no和GFP转染组出现2条差异蛋白条带,分子量为64 kDa和49 kDa;银染凝胶电泳显示,用抗TK抗体免疫共沉淀后有一分子量约为64 kDa差异蛋白;质谱鉴定出19种差异蛋白;TK浓度依赖性上调Homer1b/c和Flotillin-2的mRNA表达。结论质谱鉴定结果显示与TK相关的脑蛋白分子量在4065 kDa。TK的作用机制很可能与Homer1b/c和Flotillin-2有关。

• 单位
  滨州市人民医院