甜菜夜蛾Secrt基因克隆及其对甜菜夜蛾核型多角体病毒DNA复制的影响

作者：韩敏敏; 孙紫德; 方正; 吴庆珊; 翁庆北^*

来源：基因组学与应用生物学, 2022, 41(08): 1608-1616.

DOI：10.13417/j.gab.041.001608

• 基因克隆
• 钙网蛋白
• 甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeMNPV)
• 甜菜夜蛾
• 病毒DNA复制

钙网蛋白(calreticulin, CRT)是一类真核生物中高度保守的Ca2+结合蛋白，在病毒复制中起重要作用。为研究甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)Secrt基因及其在甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus, SeMNPV)感染细胞中的作用，本研究以宿主Se301细胞cDNA为模板，通过无缝克隆技术获得Secrt基因的完整开放阅读框1 200 bp,其编码399个氨基酸。SeCRT蛋白的相对分子量为45.86 kDa,生物信息学分析发现其含有信号肽、无跨膜结构域，含有2个O-糖基化位点及28个磷酸化位点，C结构域末端具ER驻留信号HDEL,是定位于内质网上的亲水性蛋白质。以最大似然法(Maximum likelihood method)构建系统进化树，聚类结果表明SeCRT与其他鳞翅目(Lepidoptera)昆虫CRT聚为一类，其中与斜纹夜蛾(Spodoptera litura) CRT的相似性高达98.25%。实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR, RT-qPCR)检测表明，SeMNPV感染Se301细胞后，其Secrt基因表达在mRNA水平上呈现先降低后升高最终趋于平稳的趋势，表明Secrt基因响应病毒的感染。随后通过RNAi干扰技术敲低Secrt基因，发现SeMNPV病毒DNA复制减少43.4%,表明Secrt基因影响病毒DNA复制。研究结果为进一步阐明宿主基因Secrt在SeMNPV感染中的分子机理及病毒和宿主间相互作用机制奠定基础。

• 单位
  贵州师范大学; 生命科学学院; 黔南民族师范学院