山羊干扰素-τ的原核表达及其在猫肾细胞中的抗病毒效果检测

作者：孙莹慧; 夏叶; 李春华; 郭佳宏; 蔡娟; 缪德年^*

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(04): 410-415.

• 山羊干扰素-τ
• 原核表达
• 猫肾细胞
• 抗病毒活性

为制备重组山羊干扰素-τ(rGoIFN-τ)并检测其在猫肾细胞(F81)中的抗病毒活性，本研究根据大肠杆菌密码子偏好性优化合成Go IFN-τ基因后，将该基因克隆至p Cold II载体，获得重组质粒p ColdII-rGoIFN-τ，经鉴定正确后将其转化大肠杆菌Rosetta (DE3)，经IPTG诱导表达后SDS-PAGE鉴定，利用镍离子亲和层析柱纯化蛋白，纯化的r Go IFN-τ经western blot检测后采用BCA法测定蛋白浓度。结果显示，r Go IFN-τ在大肠杆菌DE3中得到可溶性高效表达，表达量占菌体总蛋白的28.70%，纯化后蛋白浓度为100 mg/L，且具有良好的反应性。采用CCK8法检测r Go IFN-τ对F81细胞活力的影响，结果显示，其在0.0055 ng/mL～5 500 ng/mL时对细胞的活力基本无影响。以水疱性口炎病毒(VSV)为模式病毒感染已与r Go IFN-τ共孵育24 h后的F81细胞，通过微量细胞病变抑制法检测r Go IFN-τ在F81/VSV系统中的抗病毒活性，结果显示，r Go IFN-τ抗VSV活性单位数为4.55×105 U/mg。经不同浓度的r Go IFN-τ(55 ng/m L、550 ng/mL、5 500 ng/m L)共孵育后的F81细胞分别感染VSV，经Reed-Muench法和荧光定量PCR法检测r Go IFN-τ的抗病毒能力，结果显示，感染24 h和48 h后r Go IFN-τ可显著抑制VSV的病毒滴度和VSV-L基因转录水平(P<0.05)，尤其是5 500 ng/m L r Go IFN-τ的作用最佳。综上所述，本研究实现了r Go IFN-τ原核可溶性高效表达，并首次证实其在猫F81细胞中具有较好的抗病毒活性，为进一步研究r Go IFN-τ在猫抗病毒性感染中的作用奠定了基础。

• 单位
  上海市农业科学院