OEPR法构建mETX-mCPA表达质粒及其重组蛋白的免疫效果评价

作者：彭小兵^*; 彭国瑞; 李旭妮; 董令赢; 冯丽芳; 蒋玉文

来源：中国兽医学报, 2019, 39(08): 1500-1505.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.08.14

• ETX
• CPA
• 产气荚膜梭菌
• OEPR法
• 免疫效果
• 家兔

为了确定产气荚膜梭菌ε毒素(ETX)和α毒素(CPA)无毒突变体作为亚单位疫苗同时预防D型和A型产气荚膜梭菌病的免疫效果,试验用点突变结合OEPR法构建重组质粒pET32a-mETX-mCPA。将阳性重组质粒转入E.coli BL21(DE3)中,以预先添加乳糖的自诱导培养基表达目的蛋白。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白相对分子质量约为92 000,与预期值一致。Western blot检测结果表明,重组蛋白可被A型产气荚膜梭菌阳性血清所识别。致死性试验结果表明,重组蛋白不致死小鼠。以铝胶为佐剂将重组蛋白免疫家兔,二免血清0.1 mL可分别中和3个小鼠MLD的A型毒素和100个小鼠MLD的D型毒素。本研究用OEPR法成功构建了无毒突变体pET32a-mETX-mCPA质粒,获得的重组蛋白在家兔上显示出良好的免疫效果,为研发A、D型产气荚膜梭菌二价亚单位疫苗奠定理论基础。

• 单位
  中国兽医药品监察所