pBR322-Red介导的E.coli染色体基因敲入、位点及表达研究

作者：陈伟; 李山虎; 于梅; 王鸣刚; 周建光

来源：遗传, 2006, (01): 71-77.

DOI：10.16288/j.yczz.2006.01.014

• pBR322-Red
• 重组工程
• 基因敲入
• 霍乱毒素B亚单位

应用pBR322-Red介导的重组工程系统,kan/sacB选择反选择系统,双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术,将长度为1 653 bp的luc报告基因分别敲入到E.coliW 3110染色体lacZ,lacY和lacA基因的位置,建立了一系列具有新遗传表型的菌株:CWL2、CWL4和CWL6。荧光素酶分析表明,外源报告基因luc能在这3个结构基因处有效的组成型表达。为了进一步确定外源基因的表达情况,用霍乱毒素B亚单位基因ctxb替换了lacZ基因,构建了新菌株CWD1。证明了以单拷贝形式存在在大肠杆菌染色体CWD1上的ctxb基因能有效的表达CTB蛋白并能将其分泌至细胞外培养液中。结果初步确定了大肠杆菌染色体上的lac操纵子结构基因位点适合外源基因的敲入和表达。

• 单位
  厦门大学; 生命科学学院; 军事医学科学院; 广东药学院