大肠杆菌D-乳酸脱氢酶(FAD)的分子克隆与酶学性质

作者：冯静茹; 于立雪; 田康明; 牛丹丹; 王正祥^*

来源：食品与发酵工业, 2021, 47(17): 22-26.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027389

• 大肠杆菌
• D-乳酸脱氢酶(FAD依赖型)
• D-乳酸

黄素腺嘌呤二核苷酸(flavine adenine dinucleotide, FAD)依赖型D-乳酸脱氢酶能够催化D-乳酸脱氢生成丙酮酸,是生物体代谢D-乳酸的关键酶。从大肠杆菌B0013基因组中克隆出D-乳酸脱氢酶(FAD依赖型)编码基因dld,并在大肠杆菌JM109中实现重组表达。重组D-乳酸脱氢酶在35℃和pH 7.0下表现出最高酶活力;在30～40℃和pH 5.0～7.5具有较好的稳定性;Zn2+对该酶有明显的激活作用,Mn2+、Cu2+、Mg2+和SDS对其有明显的抑制作用;该酶高度特异地作用于D-乳酸,在35℃、pH 7.0条件下对D-乳酸的Km值和Vmax值分别为0.057 mg/mL和0.054μmol/(mL·min),kcat值为0.275 min-1,kcat/Km为0.435 mL/(mg·min)。该酶可用于D-乳酸的酶法定量检测。

• 单位
  材料学院; 天津科技大学; 生物工程学院