猪源牛病毒性腹泻病毒与猪瘟病毒一步法双重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

作者：梁洪; 王怀禹; 粟元文; 魏玲

来源：中国兽医杂志, 2021, 57(10): 25-29.

• 猪源牛病毒性腹泻病毒
• 猪瘟病毒
• 一步法
• 双重RT-PCR
• 鉴别检测

为了建立一种快速鉴别检测猪源牛病毒性腹泻病毒(猪源BVDV)和猪瘟病毒(CSFV)的方法，根据GenBank中猪源BVDV和CSFV 5′UTR基因序列分别设计合成特异性检测引物，经一步法双重RT-PCR反应条件的优化，建立了鉴别检测猪源BVDV和CSFV的一步法双重PCR方法。该方法对猪源BVDV、CSFV、猪源BVDV/CSFV混合物可分别扩增出185、342、185 bp和342 bp的特异性条带，检测PRRSV、PRV、PPV、PCV-2、PEDV、JEV、TGEV均为阴性，对猪源BVDV、CSFV、BVDV/CSFV混合物的RNA检测灵敏度分别达0.95 ng、0.85 ng、8.0 ng,与猪源BVDV一步法RT-PCR检测方法、CSFV一步法RT-PCR检测方法的符合率均为100%。该方法在检测94份疑似CSFV感染病料样品的临床应用中，猪源BVDV阳性率为14.89%,CSFV阳性率为24.47%,猪源BVDV/CSFV混合感染率为5.32%。表明该一步法双重RT-PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性、准确性和临床适用性，可用于临床病料样品中猪源BVDV和CSFV的快速鉴别检测，为基层兽医工作者开展猪源BVDV和CSFV的临床鉴别诊断和流行病学监测，提供了一种简单、有效的分子生物学鉴别检测方法。

• 单位
  南充职业技术学院