Amphibacillus xylanus谷氨酸脱氢酶基因工程菌培养条件优化

作者：陈子晗; 周海胜; 尹新坚; 吴坚平; 杨立荣^*

来源：中国生物工程杂志, 2019, 39(10): 58-66.

DOI：10.13523/j.cb.20191007

• 谷氨酸脱氢酶
• 异源表达
• 比酶活
• 稳定性
• 发酵

首先构建了5株表达NADH依赖型谷氨酸脱氢酶的大肠杆菌基因工程菌,获得来源于Amphibacillus xylanus的谷氨酸脱氢酶AxyGDH。其最适温度为60℃、最适p H为8.0,该条件下比酶活达到(903.1±24.6)U/mg,酶活半衰期为167h。其次,确定了表达AxyGDH的大肠杆菌基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-28a(+)-AxyGDH的产酶条件:诱导剂IPTG浓度为0.7mmol/L、诱导温度为25℃;优化后的培养基组成为:甘油11.3g/L,酵母粉16.3g/L,Mg SO4·7H2O 0.62g/L,NaCl 0.5g/L,Na2HPO4·12H2O 17.1g/L,KH2PO43g/L,NH4Cl 1.5g/L。最后,在10L发酵罐中控制比生长速率为0.2h-1进行补料分批发酵,所得AxyGDH的发酵酶活为(9 066±45)U/ml,是LB摇瓶发酵酶活的51.1倍,为谷氨酸脱氢酶的低成本生产奠定了基础。

• 单位
  生物工程学院; 浙江大学