稳定表达呼吸道合胞病毒非结构蛋白NS1细胞的构建及其生物特性研究

作者：秦笙; 王玉涛; 杨子峰; 陈俏连; 关文达; 伍时冠; 刘文宽; 郑兆广; 李海涛; 周荣

来源：病毒学报, 2011, 27(06): 587-593.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002226

• 呼吸道合胞病毒
• 非结构蛋白
• 细胞 RSV virus
• Non-structural Protein
• Cell line

获得稳定表达RSV病毒NS1基因的HEp-2-NS1细胞株并对其生物学特性进行初步研究。采用RT-PCR方法从RSV病毒中获得NS1全长基因,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,重组载体与包装质粒PIK通过磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT细胞,产生的逆转录病毒颗粒感染HEp-2细胞,经嘌呤霉素筛选后得到稳定表达细胞株,用QPCR、细胞病变染色法、RT-PCR和间接免疫荧光法检测细胞中NS1 mRNA和蛋白表达情况。结果表明重组逆转录病毒载体pBABE-NS1经双酶切及测序鉴定正确;筛选获得5株阳性单克隆细胞株,QPCR结果显示HEp-2-NS1细胞有NS1基因扩增,其中d株的相对表...

• 单位
  广州呼吸疾病研究所; 呼吸疾病国家重点实验室; 广州医学院; 广州呼研所医药科技有限公司; 澳门科技大学; 医药学院