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摘要
目的 探讨白细胞介素（IL）-18/IL-18结合蛋白（BP）介导自然杀伤（NK）-92MI细胞杀伤α-1,3-半乳糖基转移酶（GGTA1）基因敲除（GTKO）猪内皮细胞的效应及可能机制。方法 将NK-92MI细胞分为NK组、NK+IL-18组、NK+GTKO组、IL-18+NK+GTKO组和IL-18+IL-18BP+NK+GTKO组，采用实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测NK-92MI细胞中炎症相关基因的信使核糖核酸（mRNA）表达，乳酸脱氢酶（LDH）法检测NK-92MI细胞对GTKO猪内皮细胞的杀伤效应，脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测GTKO猪内皮细胞的凋亡情况，蛋白质印迹法检测具有杀伤效应的蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果 与NK组、NK+IL-18组以及NK+GTKO组比较，IL-18+NK+GTKO组NK-92MI细胞中干扰素（IFN）-γ、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-8、IL-3、IL-6和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的mRNA表达水平均升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与IL-18+NK+GTKO组比较，IL-18+IL-18BP+NK+GTKO组NK-92MI细胞中IFN-γ、TNF-α、IL-8、IL-3、IL-6和GM-CSF的mRNA表达水平均降低，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与NK+GTKO组相比，IL-18+NK+GTKO组NK-92MI细胞中穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ蛋白表达水平均升高，NK-92MI细胞对GTKO猪内皮细胞的杀伤率增加，GTKO猪内皮细胞凋亡率增加，GTKO猪内皮细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白（Bax）/Bcl-2和裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（cleaved Caspase）-3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3的比例均升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与IL-18+NK+GTKO组比较，IL-18+IL-18BP+NK+GTKO组穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ蛋白表达水平均降低，NK-92MI细胞对GTKO猪内皮细胞的杀伤率降低，GTKO猪内皮细胞凋亡率下降，GTKO猪内皮细胞中Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3的比例均下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论 IL-18BP可阻断IL-18诱导的NK-92MI细胞中炎症相关基因表达和NK-92MI细胞杀伤GTKO猪内皮细胞的效应。
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单位西京医院; 中国人民解放军空军军医大学
