犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救与鉴定

作者：文兆海; 毛丽萍; 胡远; 程瑶; 周海莹; 陈凯云; 翟少华; 简子健^*

来源：中国兽医学报, 2018, 38(12): 2334-2338.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.12.18

• 重组狂犬病病毒
• 犬瘟热病毒N基因
• 反向遗传学
• RT-PCR
• 间接免疫荧光

探究犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒的拯救及鉴定,为后期犬瘟热-狂犬病二联口服弱毒活疫苗的研制奠定基础。采用脂质体转染的方法,将纯化后的重组质粒(pcDNA-N-G-EGFP-CDVN-PM-L)与辅助性表达质粒(pcDNAN、pcDNA-G、pcDNA-P、pcDNA-L)共转染BSR细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光技术进行检测并鉴定。结果显示,对盲传至第6代、第9代病毒液进行RT-PCR检测,均出现与预期相符的目的片段(狂犬病病毒N基因片段大小为1 315bp,犬瘟热病毒CDV-N基因片段大小为1 653bp)。间接免疫荧光试验后在激光共聚焦显微镜下,试验组均可观察到大量绿色荧光表达。RT-PCR结果与间接免疫荧光试验结果相吻合,表明犬瘟热病毒N基因重组狂犬病病毒拯救成功。

• 单位
  新疆农业大学