稳定表达NLRC5基因肝癌细胞株的建立

作者：何莺华; 徐涛; 倪明明; 黄成; 李娟; 孟晓明; 李俊

来源：安徽医科大学学报, 2016, 51(01): 5-8.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.01.002

• NLRC5
• 肝癌
• 稳定细胞株
• HepG2

目的建立起能够稳定表达NLRC5基因的肝癌Hep G2细胞株。方法设计遗传霉素(G418)的浓度梯度,通过对Hep G2细胞筛选最终确定筛选药物浓度。将构建好的人源p EGFP-C2-NLRC5重组质粒利用脂质体介导法转染至Hep G2肝癌细胞株中,用G418筛选出耐药阳性克隆。通过免疫荧光技术观察绿色荧光蛋白稳定表达情况,Western blot法验证NLRC5蛋白表达情况。结果 G418在14 d内使Hep G2细胞全部死亡的最小浓度是300 ng/ml。用G418筛选瞬转p EGFP-C2-NLRC5 14 d在荧光显微镜下可见耐药克隆的形成。Western blot法检测显示,稳定过表达组NLRC5的蛋白水平比空质粒转染组高(t=15.356,P<0.05)。结论成功构建稳定表达NLRC5基因的肝癌细胞株,为进一步研究NLRC5基因在肝癌的体内实验奠定了基础。

• 单位
  安徽医科大学