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摘要
为了明确假激酶ROP8在弓形虫抵抗宿主免疫中的作用，我们成功构建弓形虫ROP8原核表达体系并研究了多克隆抗体对弓形虫增殖的影响。根据基因分析结果，在ME49虫株中获得ROP8-C的369bp的截短片段并克隆入pET28a载体中。将此质粒转化入BL21（DE3）感受态大肠杆菌IPTG，诱导并筛选诱导条件，用纯化后的蛋白免疫新西兰兔后获得多克隆抗体。Western blot显示弓形虫裂解蛋白产生了两个条带，表明以ME49虫株为总DNA模板，成功扩增出369bp的ROP8截短基因，构建出pET28a-ROP8质粒，经过测序和比对后与基因文库中的蛋白序列完全相同。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物显示，在20kDa有特异性条带且在IPTG终浓度为1 mmol/L，37℃诱导表达6 h时表达量最高。弓形虫增殖实验结果显示，此多克隆抗体抑制弓形虫的增殖，为研究ROP8在弓形虫增殖过程中的作用及其机制奠定基础，并为其作为疫苗候选分子提供新线索。
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单位安徽医科大学; 公共卫生学院
