牛叠朊编码基因缺失突变体的构建及在大肠杆菌中的表达

作者：杨生海; 殷宏; 刘永生; 马艳平; 丁耀忠; 孙彩琴; 丁小丽; 张杰

来源：中国兽医学报, 2011, (10): 1442-1448.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2011.10.007

• 牛叠朊
• 缺失突变体
• 免疫印迹
• 酶联免疫吸附分析 bovine doppel
• truncated mutants
• Western blot
• ELISA

本实验室已制备出多株针对牛叠朊的单克隆抗体,为充分鉴定这些单克隆抗体针对的抗原表位,通过基因克隆表达的策略获取牛叠朊基因缺失突变体的重组蛋白,以期为单克隆抗体的表位鉴定提供物质材料。经过对牛成熟叠朊编码基因及预测蛋白结构特征的分析,设计表达9个缺失突变体的引物。以PCR扩增出叠朊基因的缺失突变体,与pET-30a(+)表达载体连接后转入E.coli DH5α中,经双酶切和测序鉴定后将重组质粒转入E.coliJM109和E.coli BL21表达宿主菌中,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达产物的相对分子质量、相对表达量和反应原性。结果表明,成功...

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 江苏畜牧兽医职业技术学院; 农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 中农威特生物科技股份有限公司