pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1真核表达载体的构建及其在人黑素瘤细胞A375中的表达

作者：关杨; 姜祎群; 高莹; 曾学思; 孙建方

来源：中国麻风皮肤病杂志, 2009, (09): 660-664.

• 组氨酸三聚体核苷结合蛋白1
• 黑色素瘤
• 真核表达
• 稳定转染 HINT1
• melanoma
• stable transfection
• eukaryotic expression

目的:构建真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1并检测其在人黑素瘤细胞A375中的表达。方法:采用巢式RT-PCR的方法扩增带有Xba I和Kpn I酶切位点的人HINT1编码区基因,经TA克隆技术,将基因测序正确的序列克隆到空白真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A,构建真核表达载体pcDNA.3.1/myc-His(-)A-HINT1。经菌落PCR、双酶切及基因测序鉴定后,用脂质体转染法转染A375细胞,通过G418筛选,获得稳定转染的A375单克隆细胞。用免疫细胞化学法及Western blot(WB)法检测HINT1蛋白在细胞中的表达。结果:...

• 单位
  中国医学科学院皮肤病研究所