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摘要
目的 通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞（HEFs）重编程为化学诱导神经前体细胞（ciNPCs）。方法 HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段，第1阶段是小分子组合诱导阶段，常氧条件下，将HEFs在含有小分子化合物组合VCR(VPA,CHIR99021,Repsox)的KSR培养基中培养15 d,HEFs形态发生变化，形成致密细胞集落。第2阶段是特异性诱导ciNPCs，将形成的细胞集落胰酶消化后，低粘附板中悬浮培养，可以形成ciNPCs神经球。采用CM-DiI染料标记P3代ciNPCs，并将其移植于6-OHDA法制作的帕金森大鼠模型右脑内侧前脑束（MFB）区，检测ciNPCs在PD大鼠脑内微环境中的存活、迁移以及分化状况。结果 VCR组合诱导10 d细胞开始出现明显的聚集趋势，15 d时，形成致密的细胞集落。单层培养1×105/孔中大约形成40个克隆，且AP染色呈阳性。将细胞集落消化后，低粘附板中悬浮培养培养2 d，可见大量神经球形成，即为第1代ciNPCs(P1代)。ciNPC高表达神经前体细胞（NPCs）特异性标记物（Nestin、Pax6和Sox2），经体外神经特异性诱导分化，ciNPCs表达神经元特异性标记物Tuj1和星形胶质细胞特异性标记物GFAP。而且，P3代ciNPCs移植PD大鼠脑内4周后，可以分化为Tuj1+、GFAP+、TH+和GABA+细胞。结论 VCR可以将HEFs重编程为ciNPCs，而无需引入外源性基因，为神经科学研究和神经退行性疾病的治疗提供有利的供体材料。
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单位蚌埠医学院; 生命科学学院
