摘要
目的:明确鸡软骨肽的主要化学结构特征,及其抗氧化、抗炎的物质基础。方法:对鸡软骨肽进行水解,采用异硫氰酸苯酯(PITC)-柱前衍生高效液相色谱法检测鸡软骨肽水解后所得氨基酸的组成;借助LC-MS/MS以及物种蛋白质数据库,确定鸡软骨肽中主要水解多肽的氨基酸序列;利用固相合成方法制备已知氨基酸序列的多肽,采用DPPH法、水杨酸法、FRAP方法测定合成肽段的抗氧化作用,采用H2O2致C518大鼠膝关节软骨细胞损伤模型测定合成肽段对氧化损伤的保护作用,采用LPS诱导的C518大鼠膝关节软骨细胞炎症模型测定合成肽段的抗炎作用。结果:确定18种氨基酸在鸡软骨肽中的占比情况,其中占比最高的是甘氨酸(G)29.5%,其次为脯氨酸(P)11.63%、丙氨酸(A)10.61%、谷氨酸(E)9.2%;从水解鸡软骨肽中鉴定出的11条分子量为794~1 860 Da的肽段,并筛选出多条抗氧化、抗炎作用显著的活性肽段,其中综合功效最佳的肽段为G4(MEGNAEESTLFCFAVRG)。结论:LC-MS/MS结合物种蛋白质数据库是一种快速、有效研究鸡软骨肽化学结构特征的新方法,本实验借助该方法初步确定了鸡软骨肽的化学结构特征以及抗氧化、抗炎活性成分,将为深入开展鸡软骨肽的应用研究提供基础。
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