松材线虫类毒过敏原蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：林世锋; 简恒; 赵海娟; 卜祥霞; 刘倩

来源：植物病理学报, 2013, (02): 128-135.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.2013.02.004

• 松材线虫
• 类毒过敏原蛋白
• 基因优化
• 原核表达
• 多克隆抗体 Bursaphelenchus xylophilus
• venom allergen-like protein
• gene optimization
• prokaryotic expression
• polyclonal antibody

利用重叠延伸PCR基因合成法,按大肠杆菌偏爱密码子,合成松材线虫类毒过敏原蛋白基因(Bxvap2),将其连接到原核表达载体pET-29b(+)上。获得的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,目的蛋白以可溶形式高效表达,占细菌总蛋白的33.5%。将表达产物经Ni-NTA亲和柱纯化后进行质谱分析,结果显示纯化的蛋白为BXVAP2蛋白。用制备的BXVAP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测得抗体灵敏度5.4 ng.mL-1(效价为1∶1 360 000),为进一步研究该蛋白的组织定位及功能,明确该基因在致病过程中的作用机理奠定了基础...

• 单位
  贵州省烟草科学研究院; 中国农业大学