黄瓜白粉病的PMA-qPCR方法建立及应用

作者：李金婷; 张佐然; 梁雅静; 孔维文; 李云龙; 何晓青^*

来源：福建农林大学学报（自然科学版）, 2019, 48(05): 550-555.

DOI：10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2019.05.002

• 黄瓜白粉病
• PMA-qPCR
• 标准曲线
• 臭氧处理

鉴于叠氮溴化丙锭(PMA)染料可辨别细菌活性,将其与实时荧光定量PCR(qPCR)相结合,建立PMA-qPCR方法,以检测黄瓜白粉病的活性致病菌.在黄瓜白粉菌核糖体DNA的ITS区设计引物,将扩增片段重组到pGM-Simple-T载体中构建标准质粒.以5×10～5×106个·μL-1 6个梯度稀释质粒来绘制标准曲线,并做组内和组间重复.(1)qPCR标准曲线显示有良好的扩增结果,其相关系数(R2)为0.994.(2)利用qPCR检测臭氧处理后PMA染料处理组和对照组中有活性的黄瓜白粉菌数量.结果显示,PMA染料处理组拷贝数为4.335×102个·μL-1,对照组拷贝数为9.448×106个·μL-1.(3)利用PMA-qPCR方法检测臭氧处理后的黄瓜叶片不同部位(全组织、表面、内部)活菌数占总菌数的比例,处理50 min后的活菌比例分别较处理前下降了58.8%、67.0%、48.0%.这表明该方法可快速鉴定黄瓜白粉病中的活性致病菌数量,为该病的预防和控制提供技术支持.

• 单位
  北京林业大学