瞬时受体电位通道香草醛亚型-5通过调控NF-κB通路改善免疫微环境治疗小鼠动脉粥样硬化的作用机制

作者：王兴; 高爱宝; 刘洪波^*

来源：临床与病理杂志, 2023, 43(06): 1063-1073.

• 瞬时受体电位通道香草醛亚型-5
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• 小鼠" name="keyword">ApoE–/–小鼠
• 动脉粥样硬化
• 胆固醇转运
• 炎症因子

目的：分析瞬时受体电位通道香草醛亚型-5(transient receptor potential vanilloid type 5,TRPV5)对载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E gene knockout,ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化发病机制的影响。方法：构建过表达TRPV5的携带绿色荧光蛋白重组腺病毒(adeno-associated virus-TRPV5-green fluorescent protein,AAV-TRPV5-GFP)，将其转染RAW264.7细胞以及经静脉注射到ApoE-/-小鼠体内。ApoE-/-小鼠喂食含21%脂肪和0.15%胆固醇的西方式高脂食物8周后，随机分为2组：AAV-TRPV5-GFP组(n=10)和AAV-GFP组(n=10)。采用油红O染色检测主动脉病变大小，ELISA试剂盒法测定血脂、炎症因子水平，高效液相色谱法测定细胞的胆固醇酯，液体闪烁光谱法检测细胞的3H-胆固醇放射性，以及蛋白质印迹法分析胆固醇转运、炎症调节蛋白表达。结果：与0周相比，ApoE-/-小鼠血管组织中的TRPV5水平随着西方饮食喂养时间延长持续降低。在西方饮食喂养第14周时，与AAV-GFP组小鼠相比，AAV-TRPV5-GFP组小鼠整个主动脉的油红O阳性区域减少，主动脉根部病变显著减小，并且小鼠血浆甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6水平显著降低，血浆高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平显著提高并改善了HDL功能。此外，注射AAV-TRPV5-GFP的ApoE-/-小鼠的腹腔巨噬细胞中磷酸化β-连环素(phospho β-catenin,P-β-catenin)和磷酸化核因子κB(phospho nuclear factor kappa-B,P-NF-κB)的表达水平低于AAV-GFP小鼠。体外实验中，与转染AAV-GFP的细胞相比，转染AAV-TRPV5-GFP的RAW264.7细胞的油红O染色降低了34.4%，细胞胆固醇含量降低43.9%，胆固醇外流至载脂蛋白AI(apolipoprotein AI,apoAI)增加了38.3%。蛋白质印迹法显示：转染AAV-TRPV5-GFP的RAW264.7细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ATP binding cassette transporter G1,ABCG1)、B类1型清道夫受体(scavenger receptor class B type 1,SR-B1)、过氧化酶活化增生受体γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPAR-γ)、肝X受体α(liver X receptor α,LXR-α)蛋白水平显著增高(均P<0.05)，而清道夫受体A1(scavenger receptor A1,SR-A1)和低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)蛋白水平显著降低(均P<0.05)。结论：TRPV5通过调节巨噬细胞中的胆固醇转运和抑制炎症因子的释放来防止动脉粥样硬化。

• 单位
  延安市人民医院