摘要
目的研究抑制整合素连接激酶(ILK)表达对大鼠肾小球系膜细胞(RMC)细胞间隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法将大鼠肾小球系膜细胞分为RMC组(n=6)、ILK-con siRNA转染组(n=6)和ILK-siRNA转染组(n=6)。合成抑制ILK基因的siRNA,待细胞长至60%融合后,ILK-siRNA转染组和ILK-con siRNA转染组分别用脂质体转染ILK-siRNA或ILK-con siRNA,RMC组仅加入脂质体,24h后收集细胞,提取总蛋白和总RNA,用RT-PCR和Wester nblotting观察ILK和Cx43 mRNA和蛋白的表达。转染后继续培养24、48、72h,MTT法检测细胞活力。结果与RMC组和ILK-con siRNA转染组比较,ILK-siRNA组ILK mRNA和蛋白的表达均下降30%~50%(P<0.05,P<0.01),Cx43 mRNA水平增加30%~40%(P<0.05),Cx43蛋白水平增加60%~70%(P<0.01)。应用ILK-siRNA转染系膜细胞后24、48、72h,细胞活力均显著高于RMC组和ILK-con siRNA转染组(P<0.05,P<0.01)。结论抑制ILK途径可上调肾小球系膜细胞Cx43的表达,增强细胞活力;Cx43的调节可能是部分通过ILK途径实现的。
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单位解放军总医院