基于ERC-PCR的环境内分泌干扰物检测体系研究

作者：谭文婷; 罗霄; 晏泽辉; 但芸婕; 毛青; 邓国宏

来源：第三军医大学学报, 2010, 32(01): 1-4.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2010.01.001

• 内分泌干扰物
• 雌激素受体
• 雌激素反应元件
• 荧光定量PCR

目的利用雌激素与雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)间基于配体受体激活效应的生物学原理和探针的定量PCR扩增-实时荧光检测技术,建立痕量环境内分泌干扰物(endocrine disrupting compounds,EDCs)的快速检测体系。方法以2条含雌激素反应元件(estrogen response elements,ERE)并与ERα有高亲和力的DNA序列COX7RP-ERE和VitA2-ERE,作为结合探针,进行ERα体外受体-配体特异结合,形成配体-ERα-DNA探针复合体(ERα-DNA probe com-plex,ERC),荧光定量检测ERE含量,并考察17β-雌二醇(E2)、雌酮(E1)、己烯雌酚(DES)及邻苯二甲酸二甲酯(DMP)的结合情况。结果与VitA2-ERE相比,人源性COX7RP-ERE在ERα体外受体-配体结合过程中具有更好的结合效应;E1、E2、DES、DMP 4种雌激素类化合物对COX7RP-ERE的结合存在明显的剂量-效应关系,其对COX7RP-ERE结合效应的半数有效浓度(EC50)分别为0.89 nmol/L、19.9 pmol/L、0.79 nmol/L、6.31 pmol/L。结论检测体系中结合探针的结合量存在明显的雌激素剂量依赖性,这种基于ERα激活效应的ERC-PCR定量检测体系可以用于监测化合物和EDCs的类雌激素活性。

• 单位
  第三军医大学西南医院