利用Seahorse XF-96探讨不同细胞浓度和血清对线粒体功能的影响

作者：李晓栩; 崔宇; 阳一栋; 周晓英; 矫力; 王辰元; 杨诚忠; 史诗; 黄缄^*

来源：局解手术学杂志, 2022, 31(04): 284-291.

• 线粒体
• 能量代谢
• 氧耗
• Seahorse

目的 利用Seahorse XF-96探讨不同细胞浓度和血清对HUVEC细胞和U87细胞线粒体功能的影响。方法 利用细胞线粒体应激试剂盒，在不同浓度的HUVEC细胞和U87细胞中加入抑制剂(寡霉素、解偶联剂、鱼藤酮和抗霉素A)，根据细胞浓度分为2 000组、4 000组、6 000组和8 000组，根据有无血清和不同的解偶联剂浓度分为血清+低解偶联剂组、血清+高解偶联剂组、无血清+低解偶联剂组和无血清+高解偶联剂组。在Seahorse XF-96中测定线粒体的耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)，并比较HUVEC细胞和U87细胞各组线粒体的基础氧耗、质子漏、最大呼吸能力、非线粒体的氧耗、储备的呼吸能力、三磷酸腺苷(ATP)生成能力、线粒体呼吸潜力和偶联效率;比较HUVEC细胞和U87细胞之间上述指标的差异;观察血清和解偶联剂浓度对HUVEC细胞线粒体功能的影响。结果 在HUVEC细胞和U87细胞中，2 000组OCR显著低于4 000组、6 000组和8 000组(P <0.01); 2 000组的ECAR显著低于4 000组(P <0.01),4 000组显著低于6 000组和8 000组(P <0.01)。在HUVEC细胞中，与2 000组比较，6 000组和8 000组的基础氧耗、储备的呼吸能力、ATP生成能力和最大呼吸能力增强(P <0.05),8 000组非线粒体的氧耗和质子漏增强(P <0.05);在U87细胞中，与2 000组比较，6 000组和8 000组的基础氧耗、非线粒体的氧耗和最大呼吸能力增强(P <0.05),8 000组ATP生成能力、储备的呼吸能力和质子漏增强(P <0.05); HUVEC细胞和U87细胞各组间线粒体的偶联效率和线粒体呼吸潜力比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。U87细胞8 000组的质子漏高于HUVEC细胞(P <0.05); HUVEC细胞2 000组、6 000组和8 000组的偶联效率高于U87细胞(P <0.05); HUVEC细胞6 000组的ATP生成能力和储备的呼吸能力高于U87细胞(P <0.05); HUVEC细胞和U87细胞各组基础氧耗、最大呼吸能力、非线粒体的氧耗、线粒体呼吸潜力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。血清+低解偶联剂组储备的呼吸能力和线粒体呼吸潜力高于无血清+低解偶联剂组(P <0.05)，其余指标组间比较差异均无...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 重庆医药高等专科学校