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摘要
目的 基于去甲基化酶ALKBH5探讨左归丸对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化的作用。方法 体外分离培养小鼠BMSCs,将3～5代细胞随机分成：(1)成骨诱导0、3、7 d;(2)空白组(CON)、左归丸组(ZGW,1 000μg/mL);(3)使用小干扰RNA(siRNA)转染小鼠BMSCs,构建ALKBH5沉默的小鼠BMSCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测沉默效率，而后将细胞分成对照组(si-NC)、左归丸组(si-NC+ZGW)、沉默组(si-ALKBH5)、沉默+左归丸组(si-ALKBH5+ZGW)。以碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)染色法检测各组BMSCs成骨分化水平与矿化能力；RT-qPCR检测各组成骨分化相关因子COL1A1、BMP4、Osx以及去甲基化酶ALKBH5的mRNA表达水平；通过免疫印迹法(Western-blot)检测各组BMSCs中成骨相关蛋白Runx2、BMP4、BMP2以及ALKBH5的蛋白表达水平。结果 小鼠BMSCs成骨分化过程中，ALKBH5 mRNA和蛋白表达均上调。左归丸能够上调ALKBH5的蛋白表达水平，上调成骨相关蛋白Runx2、BMP2的表达，促进小鼠BMSCs成骨分化。使用siRNA沉默ALKBH5后，Runx2、Osx的mRNA表达和蛋白表达均下调，左归丸干预ALKBH5沉默细胞逆转了ALKBH5的蛋白表达下调，Runx2、BMP2相应表达上调，成骨分化能力下降被抑制。结论 小鼠BMSCs成骨分化过程中ALKBH5去甲基化酶的表达水平上调。左归丸上调ALKBH5促进小鼠BMSCs成骨分化。
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