枇杷不同组织的cDNA文库构建及评价

作者：薛岩伟; 周春华

来源：分子植物育种, 2022, 1-8.

• 枇杷
• 三萜酸
• cDNA文库
• 均一化

枇杷（Eriobotrya japonica （Thunb.） Lindl）原产中国，具有很高的营养价值。三萜酸作为一种重要的有效活性成分，在枇杷中含量较高，且在其各组织中含量差异显著。但目前在枇杷不同组织中调控三萜代谢关键基因的分子机制尚不完全清楚。为了找到调控枇杷三萜代谢的关键基因，研究DNA与蛋白质互作、蛋白质与蛋白质互作，解析调控枇杷三萜代谢的分子机制，本研究以枇杷果皮、果肉、叶片为材料，利用TRIZOL法分别提取枇杷不同组织的总RNA，分离纯化获得mRNA，采用SMART （Switching mechanism at 5’ end of the RNA transcript）技术合成cDNA，使用均一化技术进行处理，并对ds cDNA进行小片段去除，cDNA与pGADT7进行同源重组，质粒转化大肠杆菌后，菌落PCR鉴定插入片段的平均长度。首次构建了以枇杷果皮、果肉、叶片为材料的全长cDNA文库。文库鉴定结果表明，提取的总RNA和处理后的ds cDNA质量良好，文库容量达到3.72×107cfu/mL，插入片段的平均长度为1 000 bp，文库质量高，可以为后续通过酵母单杂交技术分析DNA与蛋白的相互作用、酵母双杂交技术分析蛋白与蛋白的相互作用、筛选调控三萜代谢的关键基因和研究其基因功能提供基础。

• 单位
  园艺与植物保护学院; 扬州大学