DDIT4对A549细胞增殖迁移的影响及其机制

作者：栾艳超; 彭海军^*; 韩青松; 白峰; 王明正

来源：中华肿瘤防治杂志, 2022, 29(20): 1460-1466.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2022.20.04

• 肺肿瘤
• 腺癌
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 细胞运动
• DDIT4

目的 探讨DNA损伤诱导转录因子4(DDIT4)在肺腺癌细胞中的表达及其对细胞增殖、凋亡的影响和可能机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹检测DDIT4在肺腺癌细胞系(H1299和A549)及正常肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)中表达；慢病毒转染抑制A549细胞中DDIT4表达，分为DDIT4敲低慢病毒(sh-DDIT4,分为sh-DDIT4#1、sh-DDIT4#2和sh-DDIT4#3)组和转染空病毒(NC)组。蛋白质印迹检测细胞中DDIT4沉默效果；CCK-8、平板克隆形成实验检测sh-DDIT4对肺腺癌细胞增殖能力的影响；TUNEL凋亡实验检测sh-DDIT4对肺腺癌细胞凋亡能力的影响；Transwell和划痕实验检测sh-DDIT4对肺腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。结果 qRT-PCR结果显示，DDIT4 mRNA在BEAS-2B、H1299和A549细胞中相对表达水平分别为1.01±0.04、2.19±0.09和3.10±0.09,差异有统计学意义，F=183.00,P<0.001。蛋白质印迹结果显示，DDIT4蛋白在BEAS-2B、H1299和A549中表达水平分别为0.39±0.02、0.98±0.01和1.00±0.02,差异有统计学意义，F=457.00,P<0.001。DDIT4 mRNA在NC、sh-DDIT4#1、sh-DDIT4#2和sh-DDIT4#3组中表达量分别为1.01±0.02、0.58±0.02、0.59±0.02和0.27±0.04,差异有统计学意义，F=150.40,P<0.001;DDIT4蛋白在各组中表达量分别为1.12±0.01、0.61±0.02、0.62±0.02和0.23±0.05,差异有统计学意义，F=145.10,P<0.001。CCK-8增殖实验结果显示，120 h时NC和sh-DDIT4组细胞生长率分别为0.91±0.04和0.57±0.01,差异有统计学意义，t=7.71,P<0.001。克隆形成实验结果显示，NC和sh-DDIT4组细胞克隆形成数量分别为120.70±6.64和10.67±0.88,差异有统计学意义，t=16.42,P<0.001。EdU实验结果显示，NC和sh-DDIT4组细胞的EdU阳性率分别为(64.33±1.76)%和(13.33±1.20)%,差异有统计学意义，t=23.89,P<0.001。细胞凋亡结果显示，NC和sh-DDIT4组细胞凋亡率分别为(22.33±1.45)%和(49.67±0.88)%,差异有统计学意义，t=16.08,P<0.001。细胞划痕实验结果显示，36 h时NC和sh-DDIT4组细胞愈合度分别(84.33±1.86)%和(44.67±2.03)%,差异有统计学意义，t=14.43,P<0.001。Transwell侵袭实验结果显示，NC和sh-DDIT4组穿过小室的细胞数量分别为为(118.00±3.79)和(28.00±1.73)个，差异有统计学意义，t=21.62,P<0.001。结论 DDIT4在肺腺癌细胞中表达上调，沉默DDIT4表达可抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭，诱导细胞凋亡。

• 单位
  河北省胸科医院