应用改良体细胞基因敲入技术内源标记跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1的研究

作者：宋伟; 李尚泽; 张慧慧; 缪时英; 王琳芳; 张晓东; 杜润蕾

来源：医学研究杂志, 2011, 40(11): 21-24.

• 基因敲入
• RHBDD1
• 同源重组

目的应用改良的体细胞基因敲入技术将标签序列靶向敲入目的基因。方法设计引物并构建RHBDD1的打靶载体,经过腺相关病毒包装、感染、新霉素筛选和鉴定等步骤获得含有新霉素抗性的阳性单克隆细胞株,最后通过cre病毒感染和筛选获得RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果经过包装病毒感染与筛选验证后得到6个打靶阳性克隆;进一步经cre病毒感染与筛选后得到2株去除新霉素抗性标记的阳性细胞克隆;通过Western blotting实验证明RHBDD1-FLAG-SBP融合蛋白的表达。结论通过改良的体细胞基因敲入技术成功构建跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 清华大学; 北京协和医学院; 中国医学科学院基础医学研究所